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Il virus della peste suina africana (PSA) è un agente patogeno altamente trasmissibile che colpisce i suini, causando una malattia devastante con alti tassi di mortalità nelle popolazioni non esposte in precedenza. Data la probabilità di un impatto economico significativo associato a un'epidemia di PSA, negli Stati Uniti sono state stanziate ingenti risorse per proteggere l'industria suinicola da questa minaccia. Le epidemie in corso di PSA nella Repubblica Dominicana e ad Haiti minacciano ulteriormente l'industria suinicola statunitense, data la loro vicinanza e il loro coinvolgimento negli spostamenti da e verso il Nord America. Sebbene siano in corso programmi di sorveglianza, durante le epidemie sono disponibili test point-of-care (POC) limitati, con gli standard di sensibilità e specificità dei test di laboratorio (ad esempio, PCR in tempo reale [rtPCR]). Tuttavia, i sistemi di test basati su CRISPR-Cas, sviluppati di recente, potrebbero offrire risultati di qualità comparabile.
Materiali e Metodi: Abbiamo cercato di sviluppare un metodo di rilevamento visivo a basso costo per la peste suina africana (PSA) utilizzando una tecnica CRISPR-Cas12a dipendente dall'amplificazione della polimerasi ricombinante (RPA), utilizzabile sul campo come test point-of-care (POC).
Risultati: Il nostro test CRISPR-Cas12a ha mostrato sensibilità e specificità paragonabili alla rtPCR, sia visivamente che quantitativamente tramite un lettore di fluorescenza. In campioni di sangue intero provenienti da casi sospetti o negativi per la PSA, il nostro test CRISPR ha raggiunto una sensibilità del 98,3% (102 copie di DNA) e una specificità del 100%. I risultati del nostro test RPA-CRISPR possono essere visualizzati in soli 7 minuti, con un picco di fluorescenza a 40 minuti (fasi RPA e CRISPR).
Conclusioni: I nostri risultati pongono le basi per una valutazione su larga scala del test POC per il rilevamento della PSA e offrono un flusso di lavoro robusto che funziona con i campioni diagnostici comunemente utilizzati.
Kambakam S, Thomas J, Robbe-Austerman S, Shanmuganatham K, Palinski R. Rapid identification of African swine fever virus in diagnostic samples using CRISPR-Cas. J Vet Diagn Invest. 2026 Mar 25:10406387261432985. doi: 10.1177/10406387261432985. Epub ahead of print. PMID: 41882914; PMCID: PMC13021537.
